Séminaire externe - ian carter-o'connell, santa clara university

À savoir

### Cartographie d'un signal fragile : outils de biologie chimique optimisés pour décrypter la régulation de PARP14 L’ADP-ribosylation (ADPr) est une modification post-traductionnelle polyvalente qui constitue un langage de signalisation clé dans la physiologie cellulaire et les pathologies. Cependant, le « décodage » de ce langage reste un défi majeur en biologie chimique en raison de l’instabilité intrinsèque des liaisons chimiques impliquées, notamment les liaisons ester labiles formées sur les résidus glutamate (Glu) et aspartate (Asp). Dans notre laboratoire, entièrement animé par des étudiants de premier cycle, nous nous concentrons sur le développement d’outils robustes pour capturer ces signaux transitoires et élucider leur rôle dans la santé humaine. Une stratégie courante pour stabiliser ces modifications consiste à utiliser l’hydroxylamine (HA) afin de remplacer le motif ADPr par une étiquette acide hydroxamique stable (+15 Da). Bien que largement employée, cette méthode souffre souvent de marquages non spécifiques et d’une hydrolyse compétitive, pouvant entraîner des faux positifs et une perte de données. Pour surmonter ces limites, nous avons optimisé un protocole de spectrométrie de masse (SM) utilisant une approche TLC-MALDI-TOF (désorption/ionisation laser assistée par matrice sur couche ultra-mince). Nos conditions optimisées favorisent l’attaque par la HA plutôt que l’hydrolyse spontanée, doublant l’efficacité du marquage et garantissant une conversion complète en moins d’une heure. Nous avons appliqué ce protocole amélioré à la protéine PARP14, contenant